基于SDS_PAGE蛋白分離

十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）在蛋白表達分析等科研工作中經(jīng)常用到?？捎糜讷@取蛋白質(zhì)樣品的電泳圖譜，結(jié)合其它基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)鑒定服務(wù)對樣品進行分析或純化，用于復(fù)雜生物樣品的蛋白質(zhì)譜分析。
百泰派克生物科技可根據(jù)您的需求，提供基于1D SDS-PAGE或2D SDS-PAGE的蛋白分離服務(wù)：基于我司優(yōu)化的標準操作流程，使用Bio-Rad Mini-PROTEAN? Tetra凝膠系統(tǒng)進行1D SDS-PAGE蛋白質(zhì)分離。將蛋白樣品(5-20ug)用上樣緩沖液稀釋到一定濃度并加熱（沸水浴5 min），根據(jù)樣品的分析目的選擇適當濃度的凝膠并將樣品上樣到凝膠孔中，加入電泳緩沖液，首先在80V電壓下恒壓分離15min，然后在120V電壓下恒壓分離60 min。分離后卸下膠板，將凝膠用考馬斯亮藍染色或銀染染色。
2D SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)使用IPG（pH 3-10）膠進行一維等電點聚焦，SDS-PAGE膠二維電泳進行Mw分離，實現(xiàn)蛋白分離。樣品首先使用超濾管進行純化，并將溶液體系替換為2D lysis buffer (30 mM Tris- HCl, pH 8.8, containing 7 M urea, 2 M thiourea and 4% CHAPS)進行等電點聚焦。聚焦好的膠條膠面朝上放在干的厚濾紙上，擠去多余水分、礦物油及多余樣品，用緩沖液溶脹15 min后，將膠條繼續(xù)在平衡緩沖液中平衡15 min。將膠條膠面朝上放在凝膠的長玻璃板上，使用低熔點瓊脂糖封膠后，將凝膠轉(zhuǎn)移至電泳槽中，起始使用低電壓，待樣品在完全走出IPG膠條，濃縮成一條線后，加大電壓，待溴酚藍指示劑達到底部邊緣時即可停止電泳。卸下膠板，將凝膠用考馬斯亮藍染色、銀染染色或熒光染色。使用Typhoon TRIO (GE Healthcare)對膠圖進行掃描，掃描得到的膠圖通過Image Quant software (version 6.0, GE Healthcare)和DeCyder 5.0 (GE Healthcare)進行分析。

百泰派克2D SDS-PAGE示例

關(guān)于樣品：

1. 液體或固體樣品均可。
2. 1D SDS-PAGE一般需要2-30μg蛋白，2D SDS-PAGE一般需要50-1000μg蛋白。
3. 考馬斯亮藍染色、銀染染色或熒光染色的蛋白質(zhì)均可。