1、實驗介紹
同位素標記相對和可能嗎？定量（isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ）技術由AB SCIEX公司研發(fā)得一種體外同種同位素標記得相對與可能嗎？定量技術。該技術利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或賴氨酸側鏈基團，經高精度質譜儀串聯(lián)分析，可同時比較多達8種樣品之間得蛋白表達量，是近年來定量蛋白質組學常用得高通量篩選技術。
2、實驗步驟:
2.1樣品準備:將待測樣品進行定量計算出樣品蛋白濃度;
2.2蛋白還原烷基化及酶解:每組樣品各取100μg按照iTRAQ試劑盒要求進行處理，使用測序級胰蛋白酶溶液酶解后,超濾管離心收集酶解肽段;
2.3 iTRAQ標記:將ITRAQ試劑平衡到室溫,用150μL異丙醇溶解，取酶解肽段加入iTRAQ試劑后室溫反應2 h,加入水終止反應，等量混合不同組樣品，真空冷凍干燥樣品: .
2.4 LC-MS-MS分析:使用Thermo得Q-Exactive Orbitrap進行串聯(lián)質譜鑒定。
2.5數(shù)據(jù)處理及生信分析
3、iTRAQ、TMT技術優(yōu)勢：
3.1同時對2-8種不同條件樣品進行蛋白質差異分析；
3.2不會破壞所測定得蛋白質；
3.3適合樣品類型多：胞漿蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等；
3.4與凝膠分離得蛋白質定量技術相比，iTRAQ質譜定量技術可檢測到更多類型得蛋白質分子，如低豐度蛋白質、強酸（堿）性蛋白質、<10KD或>100KD得蛋白質分子；高通量，可一次實驗，實現(xiàn)多個樣品得蛋白質定性定量；
3.5標記完全，標記效率高達97%以上；
3.6幾乎兼容所有近日得樣本；
3.7定量敏感，反應速度快，實驗周期短。
4、常見樣品類型
5、示例圖
ITRAQ標記譜圖
蛋白互作圖
